2024-02-24 05:35:33

点晶体时蛋白质沉淀的原因?

最近做一个30K左右的蛋白,纯化过程还比较好,可是一点晶体全沉淀了,各位有没有遇到过,怎么处理的?


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4个回答

我们实验室也碰到这样的类似蛋白,浓度即使是1mg/ml时也会沉淀了。我们做了DLS,DLS表明其再浓度为0.5mg/ml时候都为20聚体,我们目前正在改善Buffer条件,希望进一步优化。我觉得你这个蛋白不妨先做一下DLS,看一下聚合状态,然后结合一下DLS优化一下Buffer条件就能解决。

2024-02-24 06:03:18

是在和池液混合后马上沉淀的么,还是在放置一段时间以后出现沉淀?

如果是前者,是否纯化后放置的时间太长;如果是后者,这是结晶的正常现象



2024-02-24 06:11:28

先试试降低蛋白concertration ,每次降低一半,直到有三分之一 或者一半以上没有沉淀为止

提高NaCl浓度:500mM、1M 都试试

还不行就重新截取片段


2024-02-24 06:18:02

很正常啊,我们实验室有的优化的一个条件就是一点上样立即就沉淀,可是第二天就从沉淀中看见了晶体,有些晶体是从沉淀里长出来的


2024-02-24 06:23:25

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