2020-07-29 10:36:27

如何配制信号通路抑制剂?

我刚买了几个信号通路的特异性抑制剂,分别是NF-кB(PDTC)、PI3K/Akt (LY294002)、 p38 MAPK (SB203580) ;
看说明书,PDTC的分子量是164.29,PDTC可溶于水(1mg/ml),在DMSO中的溶解度可达到100mM; LY294002 的分子量是307.3,1mg用DMSO配制,浓度为10mg/ml,共0.1ml ;SB203580 的分子量是377.43,1mg用DMSO配制,浓度为20mg/ml,共50μl。现在的问题是 不知道怎么把他们配成我需要的工作浓度(均是10uM)。不太会换算,呵呵。还有文献中浓度单位均写成uM,那这个是uM/L还是uM/mL?另外加了抑制剂预处理1h后,再加我的刺激因子,那这之前需要用PBS什么的洗掉吗?还是1h后直接加因子刺激?请做过抑制剂的多多指教! 

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细胞生物学×

6个回答

uM 是指微摩尔每升吧。先算下你打算配成多少摩尔浓度的,一般10um工作液的话可以先配成10mM或者1mM的母液,再算稀释多少倍到工作浓度
一般高浓度母液也有利于保存。DEMO稀释后保证体积比小1%,不会对细胞造成毒性就可,当然需要加一个溶媒对照组。DMSO不需要过滤除菌,如果你试验只观察24小时左右更不需要了.加抑制剂后加刺激因子,有的是更换掉,需要洗,有的是抑制剂刺激剂加在一起,不需要洗,看你试验的目的需要的。再仔细看看相关文献 

2020-07-29 10:36:50

洗,我做完了,洗和不洗都试了,洗过后细胞的增殖还是明显受抑制了,所以说预处理还是有作用的。做完后除掉阻断剂,因为通路阻断剂本身也是一种杀伤药物,不洗对结果有影响。 

2020-07-29 10:38:50

我的抑制剂,文献里是提前半小时先加抑制剂,之后换成含或不含刺激剂的培养基,但仍含有抑制剂,有时正文里没详细说,在图表说明里有。
你不妨2种都试试看看什么结果。我倾向于整个过程都加抑制剂,否则除非你的抑制剂是长效稳定而顽固地占有靶点,否则在接下来的n多小时你不能保证抑制剂都起到抑制的作用,完全地抑制了?效力减退只能抑制一小部分了?这就没有说服力了。 

2020-07-29 10:39:54

同意整个过程都加抑制剂,比如开始是2ml的体系里面加了抑制剂,后面直接加入干预因素就行了,只需要保证干预因素的终浓度正确就行了,不需要中途把抑制剂洗掉。不知道我说的对不对。 

2020-07-29 10:41:58

我觉得洗不洗不太重要,主要是之前抑制剂的作用,后面都是一样要加处理的。 

2020-07-29 10:43:20

我觉得还挺重要的,很多信号的抑制剂长时间作用对细胞会造成生长抑制和促进凋亡的作用,即使设置对照,后面的处理引起的效应就大不一样了! 

2020-07-29 10:45:03

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