2017-10-29 23:42:11

求教一下做实验的时候药物浓度梯度怎么设计?

想做同浓度的A药对B细胞的代谢影响方面的实验,现在药物的浓度梯度不知道该如何确定,查文献查来查去都没查到。而且我想把实验的药物浓度和临床的用药剂量相关

有人说 “直接用血药浓度作为实验浓度就行”,请问这种说法对吗?请问,应该怎么确定实验药物的浓度梯度啊?还有,预实验应该做些什么呢?除了MTT测细胞的活力外,是不是所有的设计的实验项目都要作呢?


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4个回答

首先不可以直接用血药浓度来做为细胞实验的用药浓度,体内环境和体外培养的环境有很大差别,不是一致性的关系。临床用药浓度还需要在细胞学实验基础上,进行动物学实验,涉及药代动力学方面。细胞学的预实验至少需要做好这样几方面准备:

1、用一段时间熟练细胞培养的常规操作,养好细胞,熟悉细胞的特性和习性,做出细胞生长曲线。

2 、确定药物效能,包括量效关系和时效关系。药物剂量即浓度的确定,从大的范围向小范围缩小,如第一次实验选择:0,0.001mM,0.01mM,0.1mM,1mM,10mM做六孔板实验,比如发现在0.01-0.1mM范围内起效,则进行第二次实验,浓度选择:0,0.01mM,0.02mM,0.04mM,0.08mM,0.1mM做六孔板实验,根据结果再做调整和选择。

3 、实验实质内容的初步测定。比如药物影响细胞代谢方面的具体机制或方式及分组等的初步探究性实验,为正式实验的具体分组和检测指标的选择与测定做好前期工作。


2017-10-29 23:43:41

可以用MTT法来筛选药物浓度。例如将细胞浓度调整为5*104,用96孔板,根据药物特点如单体还是中药提取物等,如为单体,一般情况下因其作用较强,可从10ug开始,20ug,40ug,80ug,160ug依次类推。如为中药提取物,因其成分复杂,可能有效成分作用少,一般剂量较大,可从100ug开始,200ug,400ug,800ug,1.6mg,依次类推。因MTT发快速,简便,价格低廉,可重复数次,用于药物浓度筛选比较可靠。等筛选出有效药物浓度时,就可用其作为参考,做下一步实验了例如爬片作免疫组化等,如果预实验结果满意,便可以深入进行实验了。如此,即节约经费,又省精力和时间。


2017-10-29 23:46:52

我的经验是:1.先查相关文献,确定有效作用浓度,再以此为中心,按10倍设定等比浓度梯度,进行MTT检测,作用时间点可按文献及经验确定(一般是按24h、48h、72h),也可每隔一段时间在光镜下观察,根据细胞形态的变化确定MTT检测时间。

2.如果没有相关文献可查的原创,建议以1uM为中心,按10倍设定等比浓度梯度(以10个浓度为宜),进行MTT检测,作用时间点的选择同上。如效应强,则相应下移浓度中心设定等比浓度。直至找出IC50为止。再以IC50为中心,根据药物的作用效果,重新设定浓度梯度(如2倍、4倍、8倍等),以4-5个浓度为宜,使效应曲线上最大浓度与最小浓度间差别明显,且IC50位于中间。


2017-10-29 23:48:37

也可以直接买cck8试剂盒才筛药物浓度

2017-10-31 22:35:57

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