2021-09-17 16:06:34

自制对照品在用液相检测时,流动相由乙腈等度换成甲醇梯度,用归一化法计算纯度差异很大?

自己从中药中分离成分打算用做对照品,液相流动相用22%乙腈-磷酸水等度洗脱时,保留时间47min,用面积归一化法计算纯度为98%,有机相换成甲醇,水相不变,比例甲醇33%-42% 90min梯度洗脱,保留时间61min,但纯度只有74%,在56min出现一个小峰,是这个成分就是没有分纯吗,还是可能有什么其他原因?


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3个回答

已经出了峰了,应该是你需要的物质,大小应该和物质含量和柱子有关系吧。纯度要求高的话,走下制备液相。

2021-09-17 17:47:26

不知道你的自制对照品是什么结构,可以考察一下样品的溶液稳定性,流动相换为甲醇后,可能样品的溶液稳定性不好,产品降解导致纯度降低,例如发生了酯交换反应。如果不是因为溶液稳定性不好降解产生杂质,那也可能乙腈水等度洗脱的液相条件不适合该样品的检验,可以对该检验方法进行初步的方法学验证,例如做一下回收率看看。


2021-09-17 17:49:53

走一针溶剂空白或梯度空白看看56min的小峰是什么,有可能是梯度变化产生的。


2021-09-17 17:56:19

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