我做蒽酮-硫酸法测多糖含量时,发现以蒸馏水做空白对照时,将蒽酮硫酸试剂以5:1的比例加入1ml水时,有沉淀产生,吸光度狂高,无法做空白。不知各位有没有遇到过这种情况?如何解决?
蒽酮与浓硫酸形成佯盐,加水做空白时,佯盐不稳定而析出。因为我加水与蒽酮硫酸试剂的比例是2:5,可能过多地改变了佯盐的形成环境。试着用1:4的比例加水看看效果如何。
苯酚-硫酸法理论上讲比较准确,但实际操作中必须建立全面的方法学考察实验,获得最佳的显色参数和条件,才能达到良好的重现性,另外,对操作者的操作技术有极高的要求。
那要看你的蒽酮试剂是怎么配的,出现浑浊可能是你加的蒽酮试剂的量不够,如果你的硫酸稀释过的,加的量要大一点,如果你是直接用浓硫酸配制的,应该1:3就足够了。