2022-08-12 22:43:57

包装细胞293T与PT67有什么区别?

大家好,我是临床医学的研究生。分子生物学基础不太好。现在我的实验需要自己包慢病毒。慢病毒质粒是在sigma上买的。质粒骨架是:
SHC001 MISSION? pLKO.1-puro Control Vector

产品链接:http://origin-www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=zh&N4=SHC001|SIGMA&N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&F=SPECi
map link:
http://origin-www.sigmaaldrich.com/life-science/functional-genomics-and-rnai/shrna/library-information/vector-map.html#pLKO
我们实验室有PT67细胞(CRL-12284,http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx?ATCCNum=CRL-12284&Template=cellBiology)了。据我所知,要包慢病毒最常用的是293T细胞。需要同时转三种质粒到293T细胞里去才能产慢病毒。我现在想问的是,293T和PT67细胞有什么区别?用PT67作为包装细胞包病毒是不是也要同时转三个质粒进去?还是只用把shRNA转染进PT67细胞就可以收集上清了啊?
谢谢!期待各位高手的宝贵意见!!! 

回答 0 评论
您已邀请来回答问题
细胞生物学×

4个回答

PT67应该是用来包装逆转录病毒的,这个细胞里面已经含有病毒包装所需的gag,pol还有env等元件,但是不知道慢病毒包含所需的gag,pol还有env是否与逆转录病毒一样?如果一样的话那就可以直接把慢病毒质粒转染进PT67就可以收集上清了。我觉得你可以试一试,因为慢病毒也属于逆转录病毒的一种啊。 

2022-08-12 22:45:34

pLKO.1-puro 载体上面是用的HIV-1的包装信号,PT67是基于鼠逆转录病毒的结构基因表达细胞系。二者放在一起产生的病毒粒子对pLKO.1-puro 表达的病毒基因组包装效率很差。不建议使用此策略。 

2022-08-12 22:46:44

逆转录不病毒载体往往提供了其构成的主要元件,包装信号在LTR区域附近,根据LTR的来源可以判定该载体是基于哪种逆转录病毒而构建的。 

2022-08-12 22:47:57

sigma的干扰 应该是plko咯;用普通慢病毒包装质粒 效果都很好的 

2022-08-12 22:51:22

你的回答