2024-04-19 14:07:33

绿色荧光蛋白质粒转染图 如何看是否转染上了?

我用绿色荧光蛋白质粒转染细胞48h后的图如下,我觉得B区内的细胞应该是转染阳性的细胞,而A区和C区内的细胞只出现了星星点点的黄色,请问A区和C区的细胞是转染上了?还是转染的不完全?还是没有转染上?

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细胞结构×

7个回答

包装病毒?b是,a不是可能是非特异 

2024-04-19 14:08:01

B区基本还可以看出细胞形态,应该是的;A考虑是细胞凋亡或者死亡
这个应该不存在什么转染不完全 

2024-04-19 14:10:54

 A,C可能是死亡细胞的碎片,细胞裂解后荧光蛋白释放出来。当然不排除非特异性,可以参照这个时间点之前看的照片 

2024-04-19 14:12:35

B区是转染进去的GFP,这个没问题。
AC考虑非特异荧光,可能是细胞碎片或者是细胞培养液里的脏东西,你可以把荧光强度降低一点看看,觉的你的激发光强度稍有些大,这时候非特异的背景就会强了。 

2024-04-19 14:14:07

也有可能是杂荧光,你可以将视野调至光镜,看一下是否还有细胞形态 

2024-04-19 14:29:29

细胞碎片或者培养基中的不溶物所导致的非特异性发光通常在各个荧光通道中都会有发光。从楼主的图片上看,推测楼主在拍图的时候同时用了绿色荧光和红色荧光,所以会出现图片中的黄色信号。对于那些没有细胞形态,但是只有绿色荧光而没有红色荧光的小圆点,也许是细胞调往小体或者其它细胞分离出来的具有完整膜结构物。 

2024-04-19 14:30:37

细胞有可能在紫外光激发下发出很微弱的蓝紫色自体荧光,绿色的还真么见过。楼主这批细胞还是别用了吧,即使看着像转进去的B区,细胞状态也是相当的差的样子,会极大的影响蛋白表达的 

2024-04-19 14:34:07

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