小弟最近做自噬研究 计划用透视电镜检测自噬小体;请问 我用药物处理完细胞后 ;一般需要什么流程 拿到电镜室观察呢?;然后 拍照的时候 一般怎么确定自噬发生呢?有什么参考东西可以看看吗
将细胞离心,集中在1.5EP管管底,液体是电镜用的固定液,这个可以问电镜室的要求用什么固定液;双层膜包裹,一般有溶酶体
细胞样品透射电镜实验取材处理方法:一般用培养皿来养细胞。准备细胞刮刀、1.5ml ep管,离心机等材料。 细胞直接刮下,细胞悬液离心,弃上清,PBS 清洗2 次,离心成团,加入2.5%戊二醛固定液4℃固定后送电镜室或快递。悬浮细胞、菌液可直接视为细胞悬浮液操作。固体培养基培养的菌可直接将菌落挑到PBS 中,后续操作一致。
电镜检测不像荧光,电镜发大倍数高,一般在标本里找到自噬小体就可,如果做统计,意义不大,也比较困难。
拍个整体的细胞图,可以看到细胞里自噬溶酶体的数目增加,也可以说明问题,就是统计要拍好多照片,比较耗时。费用也会高很多。