2024-03-19 11:51:36

有人做western blot转过大分子量蛋白么?

150kd.做了好多次都是大白版.欲哭无泪.
6%的胶,转膜时间1小时-2小时都试过.
哪位大侠能指教一哈,怎么办啊. 

回答 0 评论
您已邀请来回答问题
细胞生物学×

6个回答

我没做过这么大的蛋白,但我的实验中用的预染marker最大的是175kDa,12%的胶,湿转2个小时左右一般都能转过去的,我想你的蛋白10%的胶应该就可以.这些条件你可以试试

2024-03-19 11:52:12

150kd应该还是蛮容易转的,我们实验室转过250kd左右的,不过不是我做的,具体操作不太清楚。 

2024-03-19 11:52:31

 转的时间短,我做过ATM,湿法低电压转过夜差不多20小时
一抗反应时间要长,4度多放几天
我做的这个结果不太好,但条带还是有的。我师姐说我一抗的时间不够。 

2024-03-19 11:52:52

我做的是145KD的,而且磷酸化的也做了,效果还好,建议:
10%的胶,跑3小时(4度),转膜2小时,希望对你有帮助。 

2024-03-19 11:53:15

 150KD的分子跑8PERCENTAGE 的胶就可以,可以让溴酚蓝跑光再加30分钟,在胶中上三分之一处应该有你要的蛋白,转膜湿转比半干要好,100V;3H应该足够了. 

2024-03-19 11:53:35

我做过125kd的,8%的分离胶,跑胶条件:80V 30min,120v 跑到所需最小分子量到底 转膜条件300mA,4H, 一直出的挺好的 

2024-03-19 11:53:53

你的回答