2021-07-12 17:28:37

膜蛋白mRNA有表达而蛋白水平却检测不出来,为什么?

在做信号通路方面的研究,发现这个通路的一个膜表面配体分子在mRNA水平表达很高(用普通RT-PCR做的),可现在买了这个膜蛋白的流式抗体上流式检测却根本检测不到。根本没有表达。这到底是怎么回事?难道是抗体有问题?


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4个回答

给你几点建议:1、你做个普通pcr看有没有带。2、确认你买的抗体是否与你的目的蛋白的种属一致。3、确认抗体在有效期内,且保存条件符合要求。4、在抽提液中加入0.5%的triton-x100试试。


2021-07-12 17:36:59

还是先做一个western blotting保险,首先看看你要的目的蛋白有没有表达,要是western什么都没有了。流式就没有意义了。

2021-07-12 17:39:39

可能的原因“:1。RT-pcr检测阳性,并不能问题,首先你的Pcr是否存在污染,另外mRNA表达亮高,蛋白不一定表达高;2.抗体与抗原种属问题,在种属没问题的情况下,先做做WB试试。3.确定做FACS时操作没问题。

 


2021-07-12 17:40:54

实验操作 没问题的话,就要看文献了

2021-07-12 18:01:12

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