2019-11-07 12:52:30

如何检测一个蛋白的乙酰化水平?

要做一个蛋白的乙酰化水平,不知道是直接用anti-acetylated lysine antibody还是用Co-IP的方法,看了一下文章里面都是直接用Co-IP的方法,可不可以直接用乙酰化的抗体呢?


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3个回答

很简单 目的蛋白加tag比如FLAG。转染后加药刺激什么,再做IP(不是什么co-IP)拉下flag-目的蛋白,然后用广谱pan-acetylation抗体验证目的蛋白乙酰化变化,用pan-acetylation抗体检测。有一个缺憾,如果你的目的蛋白 乙酰化位点很多,即使某个位点受药物刺激乙酰化变化很明显(即使这个位点乙酰化很重要),但用pan-acetylation抗体还是看不出差异,因为如果其他位点有乙酰化 并且位点比较多并且不受你药物刺激影响的话

pan-acetylation很可能是看不出差异。这个时候 就需要有针对目的蛋白某个位点乙酰化的antibody来验证。


2019-11-07 13:03:59

请注意位点特异的乙酰化抗体是针对乙酰化位点的肽段做的免疫原,有时位点修饰不够,会产生针对这个位点的抗体,突变氨基酸后抗体不识别,造成假阳性,所以要结合干扰 去/乙酰化酶,辅助验证抗体质量。


2019-11-07 13:05:49

先用IP将PGC-1α的蛋白都拉下来,然后再用这个蛋白去,做WB。一个是总的乙酰化条带,一个是PGC-1α的条带。


2019-11-07 13:12:25

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