你遇到的问题可能不仅是脂肪酸的问题。从你描述的现象看，首先是你可能遇到了两个类似三萜未能分开，这用LH-20不会有任何效果。从谱上一般可以准确判断脂肪酸问题，但有时会遇到三萜或甾醇上与脂肪酸成酯的情况，需注意排除。你提到的脂肪酸你还未在TLC上看到，可以用溴甲酚绿显色，如不显色，可以推测为脂肪酸酯，试直接喷水，看白色斑点所在位置（脂肪酸酯），一般脂肪酸酯类杂质未必在TLC上与三萜重合。普通脂肪酸酯与三萜的分离用LH-20效果很有限，用C-18更不可行，我还是推荐你寻找其它正相条件，或用制备TLC，后者效果会更好，但有时需要多做一次。如果只剩有两个三萜分不开，在正相条件无效的情况下，可以用C-8柱试试，一般都能解决问题。

不知你用SEPHADEX LH20 是什么系统，我一般用氯仿－甲醇1:1，可以使低脂性物质分离开，你可以试一试。

sephax LH-20是分子筛作用，既然两种物质分子量差不多，用凝胶柱没什么作用了。不知道样品量多不多，不多的话试试先用反相板摸条件看看能不能分开，如果效果不好，可能还是要用正相柱了。

呵呵，展开条件的选择还是要摸索的，石油醚:氯仿系统我们不怎么用的，楼主可以试试石油醚/乙酸乙酯或石油醚/丙酮系统，后者极性稍微大点，或者氯仿/甲醇系统摸条件看。如果拖尾厉害，试着稍微加点酸试试，不过不得已条件下才加酸，否则怕化合物里面有易水解的基团或部位。如果量少且摸到毕竟好的展开条件，可以考虑湿法上柱。

既然你知道是脂肪酸和三萜，不知能否加少量的碱水，然后用石油醚萃取，你的量很大，可以少量试一试，问题是三萜是否要变化，这的注意一下。