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2024-03-20 22:45:55

目的蛋白是 16kda 和14kda，但是条带弯弯扭扭像蚯蚓一样的m型，上样量是50ug，为什么？

脑组织蛋白western，用的ripa是索莱宝公司的，cocktail是罗氏的，14000rpm离心，冰上裂解30min。后12%的胶跑western，一开始总是做不好，western的条带没有直过。后来用考马斯亮蓝染色，发现胶上的条带也是弯弯的，而且拖尾，那时候怀疑是胶没有制好，所以一直再改进制胶，但是用同实验室人的细胞提取蛋白跑了GAPDH，相当漂亮，所以不是胶的问题。后来怀疑蛋白提取问题，有人说可能是蛋白里面杂质太多，建议提完蛋白后用滤纸过滤，我照做了，现在大分子量34kda 的GAPDH及以上的蛋白都跑得很直，可是问题出来了，我的目的蛋白是 16kda 和14kda 的，还是弯弯扭扭的，像蚯蚓一样的m型。我的上样量是50ug。到底怎么回事呢？

药物学药理学

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Loading 的量少一点，跑慢一点会怎么样？能超声吗？超声试下看看。减少杂质。上样之前高速离心，甩掉杂质。

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2024-03-20 23:05:49

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建议用４％－２０％浓度梯队胶来跑，如果没有梯队胶，可以选用１２.5%的胶跑，不要跑得太开，上样量不一定那么多一般２０ug就够了。另外要确认抗体是好的，浓度要和公司确认下。

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2024-03-20 23:06:27

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提问时间：	2024-03-20
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