2019-11-17 10:15:05

按文献药物浓度处理细胞,做了24和48h孵育,药物没有抑制生长作用,与文献报道不符,为什么?

按文献上公认的几个药物浓度处理细胞(同一种药同一种细胞,有类似文献),做了24和48h孵育,药物没有抑制生长的作用,与文献报道不符,不知道哪里出问题了?我的两个猜测,请各位帮忙看看?1: 药物是骨化三醇,买的国内厂商分装的sigma粉末,会是因为药物失活吗?2. 48h这板,细胞已经布满孔,会不会是种太满了?(贴壁细胞,按5*10^4/ml浓度,贴壁24h后加药)。能做什么改进吗?


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5个回答

首先确认你的药本身没问题,配制方法、浓度什么也正确。你可以咨询一下代理或去官网看。48小时细胞太密了的话,铺板时细胞密度少些。


2019-11-17 12:14:19

确认下细胞是否有问题。有时候国内买的细胞可能不是真的细胞;多设置几个药物梯度(我们一般都是做九个梯度);24h和48h接种不同的细胞密度。


2019-11-17 12:16:51

我觉得没有关系,从我做CCK-8结果来看,细胞密度对IC50的影响不大。

如果24h和48h铺同样的细胞密度,肯定会造成一个OD值大,一个OD值小。


2019-11-17 12:17:46

镜下观察细胞状态,加药的和对照组之间死的细胞多不多?第一点:你手里的细胞以及状态都跟文献报导不一样的,你要摸一下药物的作用浓度;第二点细胞密度和作用时间也是你需要观察的,一般都是要做多个时间点的,药物还有半衰期等多种因素都是需要你去实践的。


2019-11-17 12:19:19

会不会与每个孔中细胞的数目有关系?如果你每个孔中细胞数目与文献采用的细胞数不一样,也会导致抑制率不同。还有细胞还受培养环境的影响,温度溶剂都与文献报道的一致吗?并且实验的干扰因素也很多,建议每一批次做三次重复实验。

2019-11-17 22:11:03

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