MAPK pathway的inhibitors的使用浓度以及配制方法？

各位，我最近从sigma买了MAPK信号通路中的抑制剂：U0126;SB203580;SP600125;LY294002
在丁香园search发现没有太好的帖子可以参考，不知道大家用的多不多？？
根据文献，一般使用的浓度都差不多在10uM～50uM之间，我打算用20uM，这样是否就足够了？
这几个试剂中就只有SB203580需要在-20度保存，并且都是溶解在DMSO中。看sigma的简要说明，发现它们在DMSO中溶解有的>5 mg/mL（LY294002）；有的>10 mg/mL Stock solutions in DMSO should be used within a month（U0126）；有的直接写着50 mg/mL（SB203580）；有的直接写H2O: insoluble（SP600125）。我不太明白这是什么意思，是否仅仅说的是溶解度，那么为何要说大于多少呢，溶解度不能用大于来表示吧？那么是否说的是在大于这个浓度的时候药物才稳定呢？
由于DMSO的毒性，一般是配成1000×的储液，那么储液放在-20度还是4度呢？说明书上没有说明配制好的储液该如何保存，U0126的保质期只有一个月，其它的几个抑制剂没有说保质期。希望高手指点，感激不尽！！
还有个小问题，是不是sigma的这些试剂都是无菌的呢？有没有必要过滤？（当然这几个试剂是不可能过滤的了，因为是用DMSO配制且体积很小）

凋亡坏死与自噬

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我说一下我的试验中U0126的使用情况：
我们用的浓度为50uM,在这个浓度下抑制效果不错。我们的储液浓度为10mM，避光保存在-20度。不需要过滤，因为装U0126的小瓶是无菌的，而且DMSO也是无菌的，所以配好后就直接可以使用，但注意要避光保存。

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2017-06-21 04:09:37

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在-20度保存下，储液会冻结。DMSO的熔点很低，常温下很快解冻，在冰浴下就可以冻结。根据我自己的试验结果，在-20度下保存三个月左右的U0126的抑制效果也还不错，能够达到试验的要求。关于DMSO的浓度，我们在加入U0126过程中，先在EP管中，吸取培养液把U0126储液稀释后再加入到细胞中，这样就不会造成局部DMSO浓度过高而损伤细胞。我们用的细胞是HEK293，在这个浓度下，并没有发现在培养过程中细胞出现死亡或者不贴壁。而且储液浓度过高，会导致使用过程中所需储液的体积过小，可能导致误差增大。

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2017-06-21 04:10:06

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MAPK pathway的抑制剂在使用中要注意它们可能出现的副反应。因为现有的激酶抑制剂几乎都是ATP类似物，结合在激酶的ATP结合位点来抑制激酶活性。这就限制了他们的选择性，因为体内所有激酶都有ATP结合域，结构很类似。这些抑制剂可能在较低的浓度下选择性抑制某一种目的激酶，但是在浓度较高的情况下，会同时抑制其它激酶分子，为实验带来不可预知的影响，造成假结果。一般选择文献中报道过的可达到最大抑制程度的最适浓度即可，个人认为20uM浓度已经不算低了。当然最可靠的数据要来自于负性突变、RNAi以及基因敲除实验的结果。

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2017-06-21 04:10:31