2017-06-08 06:46:51

用JC-1考察细胞线粒体膜电位,结果异常,请问什么原因?

情况是这样子的,我用JC-1考察两种细胞的线粒体膜电位(用流式做),一种细胞出来的结果是正常的,就是control组(单加JC-1组)红色荧光强于绿色荧光,阳性对照组绿色荧光强于红色荧光。但另一种细胞出来的结果是反着的,单加JC-1组的绿色荧光明显强于红色荧光,加了CCCP以后反而红色荧光变强,强于绿色荧光,在荧光显微镜下也是这样的,单加JC-1组的细胞只能看到绿色荧光,阳性对照组在绿色荧光中有星点状红色荧光。我两种细胞的处理方法完全一样,后来考虑是不是不同细胞染上色的浓度会不同,对异常细胞处理时JC-1的浓度从1uM变化到30uM,但都是相同的结果,请问高手,这是怎么了?下面出流式图:首先是正常的情况:
Control组:

图片3.png

阳性对照组:

图片4.png


异常细胞:
这是Control组:

图片5.png



阳性对照组:

图片6.png

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凋亡坏死与自噬×

2个回答

 根据数值显示,所谓异常细胞阳性对照组的绿色荧光跟红色荧光都减弱了,并不是你说的一个增一个减。这说明线粒体损伤还是有的。
这里的一个特点是,绿色荧光的衰减幅度明显大于红色荧光。也就是说胞浆内的JC-1 monomer的含量大幅度降低。
我考虑是不是你这个浓度的阳性药破坏了细胞膜的完整,导致胞浆内的JC-1 monomer 大量外逸。
你把CCCP的浓度降低一些试试。


2017-06-08 06:47:35

JC-1 本来就不溶于水。正确的说法叫做分散。个人经验,最好的分散方法是probe sonication,几十秒钟就行。注意冰浴。


2017-06-08 06:47:54

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