2024-04-04 00:02:52

有哪几种方法使miRNA在人肿瘤细胞中过表达?

除了构建质粒转染,还有没有其它更方便简洁的方法?看到有人说可以直接人工合成miRNA mimics,那么合成之后是怎么导入细胞的?直接与脂质体结合导入吗?

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细胞生物学×

2个回答

质粒转染效率太低,像miRNA这种小分子的短链RNA,最好的方法就是使用腺病毒进行包装,然后直接接种到培养的细胞中进行稳定转染,效率很高,效果也很稳定。如果使用miRNA 的mimics过表达或者使用inhibitor进行敲除,都是需要使用脂质体2000进行瞬时转染的,如果仅仅是几次小实验需要转染,这种瞬时转染足够。但是如果想深入研究一个miRNA的功能,并且以后还有可能会继续研究这个miRNA的其他功能,推荐直接构建病毒载体,因为稳定转染之后细胞系能用很久,长期成本就比较低了。其实一个lipo2000也不便宜,每次转染用量也不小,时间长了瞬转还不如病毒一次性解决实惠。所以看你的需求啦。


2024-04-04 00:03:21

我们是用化学瞬时转染,用的是lipo3000,lipo2000的升级版,对细胞毒性小一些,转染效率还可以,但是也分不同的细胞株。转的是mirna 的minics和inhibitor,直接是瑞博购买的。希望对你有用。


2024-04-04 00:03:38

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