2022-06-23 20:28:17

MTT实验结果一直不佳,如何破?

目前我做甲状腺未分化癌细胞株的HTh74R dox的细胞耐药性MTT实验,按规范操作,一直出现以下几个问题:1. 细胞在96孔板中生长不均匀,导致MTT结果同浓度复孔相差很大。组间无规律浓度梯度差异。2. 该细胞种96孔板时需48小时才能贴壁且生长缓慢,而在6孔板或培养皿中生长良好,24小时就能长满。请养过该种细胞或技术高手指点,谢谢


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肿瘤与细胞×

5个回答

 如果药物毒性不是很大 请用克隆形成代替


2022-06-23 20:28:47

是不是实验环境没有满足要求? 细胞放太久或者复苏多次也会影响耐药性,还有操作的时候也要比较小心,我之前做酶活的时候,用96孔板经常会漏加样,或者重复加样的。所以要很专心很仔细~                


2022-06-23 20:29:12

 MTT和DMSO都需要避光


2022-06-23 20:29:33

1. MTT中细胞种板这个操作环节需要注意,要及时吹打避免细胞成团,或者有人将消化好的细胞吹匀分装至1.5 ml EP管里,进行接种,并且每次接种前都会吹打细胞以增加接种到孔里后细胞的密度一致性。2. 如果克服了接种密度的问题,还是不理想,那就如前面站友说的,用克隆形成实验,尽管MTT是快捷、成本很低的了


2022-06-23 20:29:53

估计是重复性上面的问题,可以尝试从细胞、加样,环境几方面入手排除。


2022-06-23 20:34:32

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