2024-04-15 15:50:29

求助!!!

做缺血缺氧模型鼠的神经元的免疫荧光,冠状位冰冻切片,多聚甲醛固定,二抗是中山金桥的红色荧光,红色背景总是很强,调整过抗体浓度,换过丙酮固定,仍有较强背景,弱弱的问一声,是不是组织的冰冻切片免疫荧光的背景消除不了的呢?不知道做过的大神发的论文里的图片是什么样的呢?求指教,不胜感激!

模型是SD大鼠,7天大的乳鼠做的缺血缺氧模型,一抗是兔来源的,二抗是山羊抗兔,封闭液山羊血清跟BSA都试过,效果差不多,不加一抗的对照做过,没显示什么自发的荧光...总共有四组,一抗用的是abcam的MAP2,二抗用的是中山金桥的594,一抗1:100四度过夜,二抗1:200室温1h,每一组我都有做过了的,背景都是差不多的呀...封闭液用山羊血清好呢还是BSA好点?

40X镜下所示,dapi+二抗

图片3.png

回答 0 评论
您已邀请来回答问题
神经生物学×

2个回答

封闭肯定是山羊的血清好一点,特别是背景高的时候。有没有只用二抗不加一抗的?也许你这个是二抗的非特异性吸附。


2024-04-15 15:55:29

最好把对照的图也放上来对照,空表,一抗对照,二抗对照,一般二抗对照出现假阳性的问题比较多


2024-04-15 15:55:52

你的回答