求助啊~siRNA转染组比对照组有更高的目的基因的表达 (大概高30-40%),且统计学上P<0.01.完全按照protocol来,应该没标错样品,转染了2天后,换成正常的培养液,再过2天,收了细胞,提了RNA,做了PCR。怎么会这样?有没有可能siRNA在转染4天后就失效了?转染组细胞为了弥补之前的“被抑制”,就更多的表达目的基因?谢谢大侠们!
应该是转染效率太低了,转染效率低导致进入细胞的siRNA比较少,刺激细胞产生应激反应,导致目的基因不降反而升高,转染效率高的话就没事了。PS:如果转染效率很好,但没有干扰,是序列不行,要换干扰序列。
建议更换序列。siRNA的效率一般不超过96h。
siRNA要做基因沉默,也就是RNA干扰;至于你的转染效率,你可以先转那些带荧光标记的载体做个预实验,看你的靶细胞好不好转染,摸索好条件再转你的siRNA