如果实验室有进口的探头式超声破碎仪的话,直接加PBS超声破碎悬浮细胞即可。有时要加磷酸二酯酶抑制剂。贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer,有时要加磷酸二酯酶抑制剂。关于是否需要乙酰化的问题,不同的试剂盒有不同的要求,主要取决于抗体是否灵敏,也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏,可以免去乙酰化的那一步,太容易引入误差。 |
我用的是125I的RIA kit,我们核同位素室的老师说,照常处理你的细胞,离心去上清后加入0.4ml 1M的高氯酸就可以了。不过要预实验一下,摸索浓度。 |
普通的Lysis buffer 就可以,但是你得加IBMX抑制PDE的活性。不知道你是想做western还是干吗?如果你是要测cAMP的量,目前也有其他方法。 |
我看到的方法有两种:1)一种是cayman公司提供的试剂盒说明书里讲到的: |
提问时间: | 2024-03-06 |
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