2022-05-24 07:03:50

生物样品回收率大于100%,怎么办?

现在做一个水溶性样品,样品处理方法是:取0.5ml的空白血浆,加10ul的标准品,混匀,再加30ul的高氯酸沉淀蛋白,混匀,离心10min后取上清进样进样面积记做A1;标准品的处理方法是:取0.5ml的水加10ul的标准品,混匀,再加30ul的高氯酸混匀,进样.进样面积记做A2.绝对回收率为A1/A2.我用的是外标法.这样计算出来的回收率大于100%.我自己认为回收率大的原因是因为在血浆沉淀蛋白后总体积小于(0.5ml+10ul+30ul),所以相当于把血浆中的标准品的浓度浓缩了,所以回收率大于100%.不知道我这样认为的对不对,请各位给予指教.还想请教一下:对于一个方法的认可是不是一定要求回收率小于100%呢?对于我现在方法中出现的问题给怎么解决呢?

 


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3个回答

我认为楼主回收率计算方法是可以接受的,当然A2最好是标准品直接进样的面积。但即便如此,回收率也应该小于100%。值得楼主考虑的因素有以下几点:1.色谱峰形脱尾或较宽,积分不准;2.A1、A2使用不同个体血浆,A1血浆存在污染或干扰杂峰;3.加标准品后未待充分混匀就急于加高氯酸、进样。


2022-05-24 07:04:18

沉淀蛋白的回收率可以大于100%。

 


2022-05-24 07:04:38

大于100%是允许的,因为HPLC 存在好多影响因素的,比如萃取、液相的变异等等,不超过110%都是可以的。

 


2022-05-24 07:04:56

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