应该主要是装柱的问题。干法装柱：一般我们是加入硅胶后，先初步两边同时敲柱，敲平，然后减压抽紧。之后上面用大塞子或其他东西压平，压紧。然后上样，同样压紧压平。湿法装柱：关键是装柱时要控制气泡，不停搅拌。

湿法装柱时一定要加入足够的溶剂摇晃减少气泡,装完硅胶以后再在上边敲击压紧,最后再用流动相冲两个柱体积后在上样。

这是实验室非常常见的现象，一般来说我们将之归结为手法问题，试验做的多了，装的多了，应该就会好一点；刚开始装一般都不平的。

常规的东西不想说特别多，下面介绍我在实验室装柱子总结的小技巧：

1、小柱子比大柱子好装，越大的柱子越不容易装均匀；

2、湿法上柱的时候展开剂最好多一些，这样能分散的均匀一些；

3、在往柱子里面倒的时候尽量要快些，次数少些，这样对上面的影响小；

4、一般硅胶柱子，石油醚-丙酮（乙酸乙酯）还好些，特别是氯仿-甲醇-（水）可能有气泡，我们实验室是用套个胶皮管的小棒敲，能把气泡敲出去，但是要尽量轻点，否则也可能造成硅胶在柱内各个部分的不均衡，导致流出速度不一样，造成色带不成活塞状；

5、沉降的时间一定要够，一般最少12小时，24小时也可，可以在柱子硅胶面上划线，看到几个小时硅胶面确实不变化在上样；

6、上样品关系也很大，在分散均匀的前提下尽量减少拌样硅胶的用量，上样带尽量窄。

我也曾经遇到这种问题，现在也还常有出现，个人认为：1，上样问题，尤其干法上样，容易造成洗脱剂在样品层流动不均，某侧、局部过快，得，当然快的一侧样品就先到了分离硅胶里，再有，拌样硅胶过载，也会出现这样的现象；2，大家也说了，装拄。推荐使用湿法，用锥形瓶预先将硅胶和洗脱剂均匀混合，多加洗脱剂，摇晃，放置，再摇晃，重复几次，使其充分、均匀混合，排除气泡；装拄时，我们先在柱子中放部分洗脱剂，再往里倒混匀的硅胶，尽量一次倒完，边倒边搅，然后，开柱，不断跑洗脱剂，直到柱面不再下降（7楼所说，画标记，深得我心，咱就是这么干的……握手一下）——后来发现用低压或中压，可以减少跑柱时间，硅胶也更紧密些，但是千万不能在下面减压抽洗脱剂使其加快，极易产生气泡，而且对柱上硅胶没有紧压作用。

注意点：

1. 干法装填时需要用吸耳球轻磕，让溶剂将柱内气泡赶走。湿法装填一般用石油醚，并搅拌两三分钟。

2. 上样浓度可以尽量大一些，但一定要保证均匀地的平铺在硅胶顶部。

3. 极性应缓慢增加。

4. 若发现柱中样品总是跑得不均匀，可能：

1）极性增加过快

2）硅胶吸水过多，硅胶吸水可能缘于所用试剂水分含量过大。

3）样品在洗脱剂中溶解性不好。

4）装填时不是均匀地将样品平铺在硅胶顶部。