2020-07-12 12:17:20

如何证明一个蛋白参与一个信号通路 ?

我有A蛋白的转基因鼠和对照鼠。想证明A蛋白参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通路。TCR激活后可以激活ras,MEKK,MEKKK等。是不是我首先看各通路下游的蛋白磷酸化水平在两种鼠之间有无差异。有差异再向上寻找?是可以通过这个初步筛选吗?

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细胞生物学× 凋亡坏死与自噬×

3个回答

先不要找参与哪一条通道,先要确定是否参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通道。可以用常规的活化T细胞的方法(anti-CD3和anti-CD28)刺激实验组T细胞和对照组T细胞,比较两者之间的增殖能力,分泌细胞因子的能力是否有显著差异。如果有,那么可以说明你的A蛋白参与此过程,然后再进一步做实验,研究其机制问题。


2020-07-12 12:47:27

T细胞的活化是比较复杂的,有些活化剂能够促进其增殖并且使其分泌细胞因子,有的只能活化T细胞,不能使其增殖。
anti-CD3一般需要结合anti-CD28才能使T细胞增殖。


2020-07-12 12:54:15

只有anti-CD3无法完全使T细胞活化而使其增殖,必须还要有anti-CD28的信号才能使其完全活化。你看T细胞增殖的有关文献一般都会看到使T细胞增殖必须要有这两个信号(TCR信号和辅助性因子信号)。
联合加的话很简单,只要加两个抗体就行了,一般包被有抗体的板子都会包被这两个抗体,很少只包被一个抗体的。没有包被的板子直接加入抗体也是可以的。


2020-07-12 12:56:01

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