你好，就是我们有时候会把组织切下来后，新鲜组织放在裂解液里裂解，然后加western的上样缓冲液（蓝色的，含有SDS），100℃，5-10min，蛋白都变性了，包括蛋白酶。然后冻在-80℃。
EMSA这样的方法，文章里其实很少会有看到，应该不如western，免疫荧光常见。我们实验室已经五年没有人做EMSA了，其实NF-kB的激活，可以做western，也可以买商品化的NF-KB激活试剂盒，通过检测荧光等方法用酶标仪做。
其实无所谓了，看你实验室的平台擅长做哪个，你就做那个好了。自己能做好才是最重要的

 NF-KB在细胞内还是比较好检测的，其磷酸化后才是激活状态，找可识别磷酸化NF-KB的抗体做WB，就知道它是不是被激活了

检测NF-KB激活采用的免疫荧光法是指：当NF-kB在细胞浆中激活后，转位进入细胞核，从而调节基因表达。你可以通过免疫荧光观察加药或刺激后，NF-kB是否进入细胞核来判断其是否激活。