2021-11-13 12:59:07

MTT细胞毒性试验加药组高浓度的OD值比低浓度的高,为什么?

做的第一次预实验是药物组比对照孔(只加细胞不加药)的OD值都高,对照孔的OD值0.2左右,然后实验室的师兄师姐说对照孔的OD值太低了,建议我多养几天。于是我就把细胞种完96孔板(种了2个板)之后,一个养了2天,一个养了3天。养了2天的对照孔OD值到0.4左右,养了3天的OD值到0.6左右,养了2、3天的都能得出加药组的OD值比对照孔的低,这至少能说明我的药物是有抑制作用的(我要的也是抑制作用)。但是养了2天的加药组的高浓度到低浓度OD值却是由高到低。养了3天的OD值最低浓度的能得出比最高浓度的高,但是由高浓度到次低浓度的OD值却还是由高到低,我真不知道原因了,为什么会这样?
我养的是子宫内膜细胞(不是肿瘤细胞),种的是96孔板,4000/孔,每孔200ul,养2-3天后,去除培养基,加药200ul,作用24h后,去除药物,加入含MTT的培养液200ul,药物是由高浓度稀释为低浓度的。为了排除药物对OD值的影响,我甚至在加MTT前,用PBS清洗了96孔板,但到底是什么原因导致这种状况,次低浓度的孔OD值才0.07左右。是我种板没种均匀吗?我每加5个孔吹打一次的。请求各位前辈能帮我找找原因,能解答我的疑惑,在此先谢过大家了!


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4个回答

假设你的药物是真的可以抑制这个细胞并且剂量依赖的话,作如下可能性推测:

1、药物配置有问题;【这个可能性我觉得不高,但也是关键的一点】
2、每个孔细胞数目有问题;【铺完细胞后镜下观察下是否基本均匀一致】【强烈建议用12道连续移液器】;

3、药物作用时间不够,效果没显示出来。我们做药效一般是第1天铺细胞,第2天加药,药物作用3天,第五天测OD。仅供参考。


2021-11-13 13:30:12

 看这个意思,低浓度的药物就足够抑制生长了,为什么还要尝试更高的浓度呢,如果要看dose-dependent,也应该把浓度再降低吧


2021-11-13 13:34:24

细胞没种匀的可能性大些,另外OD值偏小,可适当调高细胞密度,种板前弄块观察板,大体观测下是否是你需要的密度。还有不知道你是怎么加药的,如果是直接用的药物母液是否和原培养基的血清,Gln,浓度一致,如果不一致,在加这些母液时,血清浓度及gln,glu浓度发生变化,有可能影响实验结果


2021-11-13 13:35:26

可能是:1.细胞状态不佳,2.加药前,不同药物浓度处理组间的细胞生长情况不一致,3.孔的位置,例如靠边缘的孔;4.药物本身的量效关系;5.多设些复孔再做做


2021-11-13 13:37:02

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