菌株是Rosetta，使用的是pET26b载体，使用0.3mM的IPTG在18度诱导表达一段可溶性蛋白，我遇到的问题是，摇瓶表达量非常好，但是上罐补料培养以后就不表达，或者表达量很低。试过多个补料方案，其中有的方案，可以长到OD600>70，但是表达量很低，个别补料方案OD600在30左右的，表达量还不错，但是也不如摇瓶，而且不是很稳定，重复性不是很理想。总体感觉，生长速度越快，表达量反而越差。质粒丢失的问题不存在，我们添加抗生素排除了这个因素的影响了。哪位是发酵高手，来指导一下，做了很久了，超级苦恼。
分析认为后期蛋白表达可能没有营养了，限制了表达，于是做了后期补充酵母提取物的方案，结论是表达量很低，而且从电泳结果看，诱导0时和后来的2h，7h基本没有区别，就是表达量不会持续增加，而且0时就有表达量，就是有一定的渗漏表达。
分析更可能的原因时表达受到了抑制，葡萄糖对乳糖操作子有抑制作用，一般都是补料停止一个小时后，才开始诱导的，按照葡萄糖的消耗速度，葡萄糖的浓度早都降至极低水平了，所以葡萄糖抑制可以排除，那么最可能的抑制就是乙酸抑制，还有没有别的原因，求教