别着急：做过凋亡的方向，说说我的经验：1、凋亡金标准是WB的cleaved casp.3，如果这个都能做出来，说明凋亡肯定存在。2、流式也是表象的金标，但是流式会延迟不少，也就说，AV染色的时间往往延后。比如24h肉眼看到不少细胞漂起，去做WB，如果抗体好，一般会有cleaved条带，但是AV流式染上的比例可能会比较低。这时候，延迟时间，或者增加药物浓度往往会很明显。3、上述要建立在正确操作的基础上。做流式凋亡容易出漂亮的图，但是几个操作很关键。试剂盒最好买BD的，一定要用试剂盒里的缓冲液，里面有钙离子；同时孵育一定要在室温，冰敷染不上。4、如果上述都具备，应该还好做的。
祝顺利。

1、av和pi两种染料，av是通过染膜蛋白看凋亡的，所以最好用加药组来做这管，这管用来调节补偿，最好要两群分明，所以与你处理浓度和时间无关，分开就好，对后面没有任何影响。pi正常组，也能分群的，所以没有必要用加药组。2、24h在形态上才看出部分细胞凋亡？ 这句话就能看出，你多半染不上。其一，24h时你才能看出部分细胞漂起吧，而凋亡流式是比较滞后的，我的个人经验是一般看到大量细胞漂起，比如大概肉眼看有60%细胞飘，而av也就能染上20-30%就不错。而你单单肉眼才看到部分漂起，说明作用时间估计差一些，染不上。 建议你再增加时间，比如36h，48h。有一次细胞几乎全飘了，我也去做了下，发现也就60%凋亡率，所以漂起的细胞不一定能被全染上，但不飘的细胞肯定染不上。

 做流式的时候，培养液里面漂浮的细胞收集了吗？也有可能是wb的敏感性较流式高，建议换个试剂盒进行流式检测

缓冲液有Ca+离子，这个非常关键，因为AV只有在他存在下才能结合。
最好用不含EDTA的胰酶，因为EDTA会损伤到膜，导致假阳性的出现；但是根据经验，也不会损伤很大，自己操作时稍微不要太用力吹打即可。