我也做过小分子量的蛋白,大概是15kD左右吧,我没有三抗,我自己的经验是:1. 电泳的时间一定不要太长,我把积层胶制的很厚,分离胶比平常的要短一些,我用的是15%的分离胶,大概跑了2/3分离胶左右的时候就停了;2. 转膜我们是湿转,时间我控制在6小时左右,恒压25-27V左右;3. 小分子量蛋白有时候会被marker的不准确而影响判断,我一般是用两种不一样的marker加在两边,来综合判断分子量,这样更准确;4. 最后就是抗体了,我通过更换了好几种抗体才成功的,更换效价更高的单抗,这点我认为极为重要,因为本来小分子量的蛋白就很容易弥散,即使上样量很大,抗体浓度很高有时候都很难出来,建议使用高质量的一抗,有条件的设立一个阳性对照组;5. 当时我是压片子显影的,我直接压了15分钟,呵呵,反正每一步都得改善吧。 |
提问时间: | 2024-04-02 |
浏览量: | 4249 |
最近回答: | 2024-04-02 |