2017-04-13 20:25:40

冻存时细胞的密度如何更简单的估算出来?

养了MDA MB 231 的细胞,想把细胞冻存上,不过在配置冻存液上遇到了些问题,想请教各位一下,

1.冻存液的配置方法
2.冻存时细胞的密度如何更简单的估算出来? 我用两种规格的培养瓶,25和75 ,如果细胞都长满的情况下,可以分别冻存多少管呢? 1.8ml 的冻存管
谢谢大家啦!!

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4个回答

我现在都是将4-5个冻存管用皮筋捆好,再裹上一层棉花,然后垂直方向再裹上一圈,保证管子所有地方都在棉花里,外面再用皮筋扎好。直接丢在-80冰箱。应该保存几个月还是没问题的。随便什么时候转移到液氮罐里。程序降温其实也就是为了保证慢一点降温,原理是一样的


2017-04-13 20:35:26

冻存液最简单是:90%培养液+10% DMSO ,ATCC上基本上也是这样说的,有人认为血清对于冻存具有保护作用,所以会提高血清的浓度,有加20%的,有90%的。我试过,一般都可以。细胞密度 10^6 /ml这样的数量级。T25长满的话,2-4管;T75长满的话,5-10管

2017-04-13 20:38:06

 1.冻存液的配置方法:冻存液:10% DMSO + 90% FBS。但是这个比例各个实验室不一样,10%DMSO一般不怎么变,剩下90%可以根据自己情况调整,我用过10% DMSO + 20% FBS + 70% 培养基,也用过 10% DMSO + 90% FBS(现在在用),都可以,细胞复苏成活率都90%以上。先配好冻存液,放在4度,等临用前再加,DMSO在常温下对细胞损伤较大,很多人因此冻细胞时冻一批死一批。
另外,最好用程序降温盒(公司名称忘了),每分钟降一度。把加好的含有细胞的冻存液放到程序降温盒里,再放到-80度冰箱,6小时后取出,再放至液氮中
2.冻存时细胞的密度如何更简单的估算出来?? 我用两种规格的培养瓶,25和75 ,如果细胞都长满的情况下,可以分别冻存多少管呢? 1.8ml 的冻存管
这个问题最好细胞计数后再冻存,经验这时候不靠谱,一般1百万/管,lml/管。


2017-04-13 21:18:31

我们实验室没有程序冻存盒。我一般是要求这样做的,细胞间冻存的细胞放在4度,收拾好细胞间出来后放到-20度1-2h(我认为4h内应该都没有问题),然后移到-70度过夜后(这个时间可以长些没有关系,很多细胞冻存好的话,在-70度保存半年以上,复苏可以90%活的)可以转移到液氮罐里长期保存。我们通常1-2年复苏看看。
另外,如果买sigma的cell freezing medium应该不错的选择。关于细胞密度的话,对于买的冻存液,我们通常T25,4-6只(0.5mL)。还有,我在实验室通常要求,复苏的细胞在液体里传代10代内使用,通常split时间3-4天,做转染等实验是第三代开始。希望这些小的经验对你和大家有些启发。

2017-04-13 21:27:36

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