ERK磷酸化蛋白和总蛋白做对照，抗体都需要哪些？

预做磷酸化ERK-MAPK，看了好多关于裂解液的配方，发现每个人用的好像都不同，有些晕。请教各位高手，要做药物体外刺激细胞，测其磷酸化ERK-MAPK。

1、请做过这方面试验的高手，细胞裂解液的详细配方。

2、此外，磷酸酶抑制剂都必须用哪些？

3、ERK磷酸化蛋白和总蛋白做对照，抗体都需要哪些？

生物化学分子生物学

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1:一般实际用的比较多的其实是RIPA裂解配方：50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM PMSF、1 mM EDTA、1% Triton x-100、1%脱氧胆酸钠、0.1% SDS；

2:由于你提取的是磷酸化的ERK,应该还要加入NA3VO4,NaF,以防磷酸化蛋白的降解；

3:抗体主要有P-ERK,ERK就可以了

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2017-03-07 13:50:46

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RIPA蛋白酶抑制剂
苯甲基磺酰氟（PMSF）（用异丙醇配制成200mM的储存液，室温保存）
EDTA（钙螯合剂；用H2O配制成100mM的储存液，PH 7.4）
亮抑酶肽（Leupeptin）（用H2O配制成1mg/ml的储存液，分装，-20℃保存）
抑蛋白酶肽（Aprotinin）（用H2O配制成1mg/ml的储存液，分装，-20℃保存）
胃蛋白酶抑制剂（Pepstatin）（用甲醇配制成1mg/ml的储存液，分装，-20℃保存）
RIPA磷酸（酯）酶抑制剂
激活的Na3VO4（用H2O配制成200mM的储存液，见Sodium Orthovanadate Activation Protoco）
NaF（200mM的储存液，室温保存）
注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂

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2017-03-07 14:17:06

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ERK磷酸化蛋白和总蛋白做对照，抗体都需要哪些？

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