药物诱导细胞凋亡后beta-actin表达降低， GAPDH也降低。可能是什么原因啊？

我发现药物诱导细胞凋亡后beta-actin表达降低，western做了好几次也是这样？GAPDH也降低。可能是什么原因啊？排除总蛋白定量问题，定量很准确。此外电泳上样量也没有问题。有没有可能是RIPA裂解液失灵了？因为我的RIPA裂解液在-20冻了2年了，还在用，是不是可能是个东西失效了，导致蛋白提取出现了问题？

细胞生物学生物物理学

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感觉如果是beta-actin或GADPH单个降低的话有可能是实验操作的问题，两个都有问题的话你就要考虑下试剂的问题了。

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2024-04-14 12:18:29

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gapdg都下调了会有两个原因，

一个是凋亡太厉害，很多蛋白都降解了。
第二就是内标没有定好。这一部分也是凋亡引起的。总之，要么可能你刺激凋亡的条件太厉害，要么上样量要根据内标的差异重新定。蛋白浓度只是一个参考而已。精确的定量还是要靠内标。ripa放负二十没什么问题的。测的出来蛋白含量就没问题。

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2024-04-14 13:32:20

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1）染膜，看一下蛋白，尤其注意高分子量蛋白，就知道样本是否降解、上样和转膜的情况了。2）RIPA中的蛋白酶抑制剂不能长期保存。可以将RIPA、蛋白酶抑制剂和、磷酸酶抑制剂分别分装，避光保存，不要反复冻融。每次用时，向RIPA中加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂（如有必要）。放置时间长了，磷酸酶抑制剂也会变质，呈现黄色（钒酸钠）。

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2024-04-14 14:09:46

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凋亡了细胞有的死了 pbs洗时洗掉了，再则细胞凋亡了蛋白质合成也少了

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2024-04-14 14:14:35

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药物诱导细胞凋亡后beta-actin表达降低， GAPDH也降低。可能是什么原因啊？

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