2025-04-21 10:49:33

为什么要在肿瘤细胞里加一种抗生素而让细胞产生抗性?

想问下,在肿瘤细胞转染的过程中,为什么要在肿瘤细胞里加一种抗生素而让细胞产生抗性?且抗生素的种类繁多,选哪种才是最合适的?


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肿瘤与细胞×

4个回答

一般是转染过后才加的抗生素,目的是筛选出转染成功的克隆。至于选择何种抗生素,要根据你转进去的质粒DNA带何种抗生素的抗性来决定。
转染过程如果加抗生素,因为包膜孔径放大,细胞敏感性增强,容易死亡。


2025-04-21 11:35:07

嗯,这个问题吧,其实看看书就知道了,算是分子生物学的入门技术问题吧。
其实很简单。你在转染细胞是为了表达一个目标基因。但是不论怎么转染,转染率都无法达到100%。根据细胞种类和转染手段的不同,从1%-80%都有可能。其结果就是很多细胞都没有你要表达的这个基因。那么怎么办呢?目前有几个办法来解决:
1. 最简单的就是在你转染的质粒当中加入一个抗生素抗性基因。这样凡是表达了这个抗性基因的也都表达了你的目标基因。一般在转染之后48小时加入抗生素,这样凡是没有这个抗性基因的细胞全部死掉。基本可以达到接近100%的细胞都表达你的目标基因。常用的抗生素有puromycin,hygropycin,等等吧。这些抗生素有不同性质,也有不同的价格,要适当选择。甚至很多人做多次转染不同的基因,因此需要不同的抗生素组合。如果只是单一抗生素,最简单的是puromycin,杀细胞非常快,一般一到两周就可以完成。

2. 另外一个办法可以在质粒里面合成其他蛋白,比如GFP。这样表达之后可以通过flow cytometry来选择。
当然,实际上还有很多不同的办法来选择,这个就要看你的具体实验设计了。


2025-04-21 11:39:53

转染细胞比较容易死      抗生素可以保护一些

2025-04-22 05:42:02

基本原理啊,同学,看书啊。

2025-05-06 09:56:16

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