嗯,这个问题吧,其实看看书就知道了,算是分子生物学的入门技术问题吧。 其实很简单。你在转染细胞是为了表达一个目标基因。但是不论怎么转染,转染率都无法达到100%。根据细胞种类和转染手段的不同,从1%-80%都有可能。其结果就是很多细胞都没有你要表达的这个基因。那么怎么办呢?目前有几个办法来解决: 1. 最简单的就是在你转染的质粒当中加入一个抗生素抗性基因。这样凡是表达了这个抗性基因的也都表达了你的目标基因。一般在转染之后48小时加入抗生素,这样凡是没有这个抗性基因的细胞全部死掉。基本可以达到接近100%的细胞都表达你的目标基因。常用的抗生素有puromycin,hygropycin,等等吧。这些抗生素有不同性质,也有不同的价格,要适当选择。甚至很多人做多次转染不同的基因,因此需要不同的抗生素组合。如果只是单一抗生素,最简单的是puromycin,杀细胞非常快,一般一到两周就可以完成。 2. 另外一个办法可以在质粒里面合成其他蛋白,比如GFP。这样表达之后可以通过flow cytometry来选择。 当然,实际上还有很多不同的办法来选择,这个就要看你的具体实验设计了。
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