2024-03-11 14:51:42

如果想验证一个基因是否参与调控某一通路,是否将这个基因通过质粒或者siRNA高表达或抑制

老板安排我做信号通路方面实验,不过我硕士阶段没怎么接触过相关实验,所以想请教一下大家,如果想验证一个基因是否参与调控某一通路,是否将这个基因通过质粒或者siRNA高表达或抑制,然后用Western和PCR检测这个通路关键蛋白和基因的表达的变化就足以验证?是否还需要补充其他方面的实验?多谢!


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3个回答

 Q1: 是否将这个基因通过质粒或者siRNA高表达或抑制,然后用Western和PCR检测这个通路关键蛋白和基因的表达的变化就足以验证?
A1: 个人觉得,初期的实验的话, 按这样思路做是对的。
Q2: 是否还需要补充其他方面的实验?
A2: 最好同时观察你的感兴趣基因如何通过你要研究的通路而引起细胞、动物发生变化(比如死亡,存活等)。按照你初期实验的结果, 找到这个通路中受该感兴趣基因调控的molecules. 然后,就可以继续向下发掘了。
好运


2024-03-11 17:53:32

我做的不是信号通路,不过还是知道一点。基本思路是这样的,但是现在的文章要求比较全,能把故事说圆。首先,你先要明确做什么?细胞和动物能不能都做?如果不能就要在某一方面进一步拓展。此外,随着Chip等技术的运用,分子间有无之间的binding的关系?对细胞形态功能的影响?诸如磷酸化、糖基化等的影响?很多方面都值得考虑,也需要阅读文献。
建议先想想有无足够的条件做全一个小的实验,再进行后续延伸~


2024-03-11 18:10:24

验证是否参与调控,初步遗传学证据可以做缺失,回补和过表达。有影响之后可以继续去做之后的进一步验证和机制研究。如果遗传学验证没有表型差异也不一定是没有参与调控,可能需要考虑到上游的调控因子。

2024-03-12 13:07:33

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