构建一个目的基因的上调质粒时，插入的CDS部分还是整个cDNA序列都插入？另外，比如目的蛋白带有flag标签，那么在空载体作对照时检测质粒转入了细胞抗flag时条带的分子大小会变小从而与目的蛋白不同吗？谢谢！
两个问题你可以这样理解：
1. 你可以将全长cDNA序列插入载体表达，市面上多个公司的来的克隆，比如在pCMV-Sport6载体上就可以直接用于过表达；2.你的问题有些模糊，我不好理解。通常情况下，加Flag标签后会出现你的目的蛋白分子量增加。
1. 你可以了解一些真核表达的基本知识。如果是全长cDNA插入的话，多数时候表达量会增加，当然，表达量大小与promoter活性，质粒大小转染效率，以及mRNA/蛋白的稳定性有关。2. 空载往往表达的Flag融合蛋白很小，在一般的wb和IF上都表现不出来。所以，通常你做wb时阴性Flag空载，尽管表达Flag，但是，往往在你Blot上体现不出来。
