2022-08-12 15:19:29

小柱的长短粗细应该如何选择?

刚做提取分离不久,之前上了个大柱粗粉了下,现在需要对粗分的东西上小柱细分,但不知道应该用多大多长的柱子,填料一般都用什么?望各位大虾指点!

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4个回答

看你的样品量及分离难易程度定。柱子径高比一般在1:5-10,书中写硅胶量是样品量的30~40倍,具体的选,择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分rf在0.2~0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶,用小柱子(例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子);如果相差不到0.1,就要加大柱子,我觉得可以增加柱子的直径,比如用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等。

2022-08-12 15:26:08

如果柱子设计的好,柱效只和柱床高度有关系。一般来说,正相硅胶大概50~80cm高度就可以了,反相40cm,尺寸排阻SEC60cm以上,离子交换40cm以下。柱径只和上样量有关系,细的柱子上样量小,粗的上样量大。

2022-08-12 21:36:55

流速挺重要,感觉每小时液面下降6厘米时效果最好,根据柱子粗细可算出不同柱子每小时的流出体积,柱上液面高度要控制,以保证流速恒定。

2022-08-12 21:40:19

一般来说作提取分离的,粗分萃取之后的浸膏多数有两种方法:大孔树脂法,硅胶柱层析(当然是大柱子了);细分最常用的就是硅胶柱层析了,当然还有ODS、聚酰胺层析和凝胶柱层析。硅胶柱层析属于分配层析,分离工作的难度主要取决于不同成分在硅胶和洗脱溶剂间的分配系数大小,分配系数差值大小也决定了所用硅胶的量,一般硅胶柱层析,样品与硅胶的比例为1:30~60,分配系数越大Rf值越小,一般来说目标组分Rf值约为0.2时较容易如其他成分达到分离效果。层析柱中硅胶柱直径与高度的比为1:10~20,对于Rf值比较接近的成分分离往往可加大到1:40以上,为了溶质在固定相与洗脱剂两相中达到平衡,洗脱剂流速宜慢些。常用的几种小柱子硅胶直径与高度约为2.6x50cm,流速0.07ml/min;4.5x60cm,流速0.3ml/min;5.5x90cm,流速0.6ml/min;6.5x120cm,流速1.2ml/min。

柱层析所用硅胶一般为100~300目之间,目数越大理论塔板数越大,细分时常用200~300目的,也有用薄层层析硅胶(硅胶H)装柱的(流速比较慢,一般需加压)。

2022-08-12 22:35:32

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