2021-09-17 04:38:54

什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加?

什么原因造成单抗长期稳定性碱性峰增加?

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生物化学× 药物化学×

4个回答

亲身经历告诉你,很大可能是氧化造成。

解决办法:1)重新开始处方筛选,加入Met或者其它抗氧化剂。2)氧化处理这个样品(如H2O2),以增加氧化比例,利用LC-MS确定各个氧化位点的发生比例,找出Top易氧化位点。3)考察氧化是否影响活性和/或PK,以确定Oxidation是否为CQA。

以上是一些思路,希望对你有帮忙。

2021-09-17 07:57:22

别的指标如何?之前听说一个文献说法就是:类似蛋白denature或aggregate一样,积累到一定程度后容易发生其它修饰如脱氨、异构、氧化等变化。这个是本质是认为一些位点被凸显了出来。

2021-09-17 09:05:24

应该是Met氧化导致碱性峰增加^_^。另外,加两句题外话:

1)从化学角度来看,Met氧化并不会导致抗体净电荷的变化。碱性峰增加的原因,其实是由于Met氧化导致分子构象的变化,与CEX发生相互作用的表面电荷发生了改变。

2)楼主如果有意深入研究的话,容易发生Met氧化的位点是:IgG1 Fc (Met252, Met358,Met428)或IgG4 (Met249, Met355,Met425),来自个人数据以及文献数据^_^。

3)楼主上述的诱导试验是用的常见的H2O2。其实也可以改用别的氧化剂,比如tBHP、AAPH等,不同的氧化剂具有不同的氧化特异性和氧化能力。

希望大家可以多多补充关于抗体氧化研究的宝贵经验

2021-09-17 09:08:09

一般可导致碱性峰的原因:焦谷氨酸化、半胱胺基化、Lys变异、酰胺化、非半乳糖基化等。也有的因素可能导致碱性峰增加(case by case):片段化、多聚体化、氧化、异构化等。做长期稳定性考核发生碱性峰增加我觉的可能是形成多聚体或氧化。


2021-09-17 09:30:17

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