亲身经历告诉你,很大可能是氧化造成。 解决办法:1)重新开始处方筛选,加入Met或者其它抗氧化剂。2)氧化处理这个样品(如H2O2),以增加氧化比例,利用LC-MS确定各个氧化位点的发生比例,找出Top易氧化位点。3)考察氧化是否影响活性和/或PK,以确定Oxidation是否为CQA。 以上是一些思路,希望对你有帮忙。 |
别的指标如何?之前听说一个文献说法就是:类似蛋白denature或aggregate一样,积累到一定程度后容易发生其它修饰如脱氨、异构、氧化等变化。这个是本质是认为一些位点被凸显了出来。 |
应该是Met氧化导致碱性峰增加^_^。另外,加两句题外话: 1)从化学角度来看,Met氧化并不会导致抗体净电荷的变化。碱性峰增加的原因,其实是由于Met氧化导致分子构象的变化,与CEX发生相互作用的表面电荷发生了改变。 2)楼主如果有意深入研究的话,容易发生Met氧化的位点是:IgG1 Fc (Met252, Met358,Met428)或IgG4 (Met249, Met355,Met425),来自个人数据以及文献数据^_^。 3)楼主上述的诱导试验是用的常见的H2O2。其实也可以改用别的氧化剂,比如tBHP、AAPH等,不同的氧化剂具有不同的氧化特异性和氧化能力。 希望大家可以多多补充关于抗体氧化研究的宝贵经验 |
提问时间: | 2024-03-04 |
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