2024-03-15 11:57:13

黄酮成分分离是过聚酰胺柱,还是用葡聚糖凝胶LH-20好?

现有正丁醇部位,经过大孔树脂洗脱,得到30%乙醇流分,经过鉴定有黄酮成分(盐酸-镁粉反应阳性)。用聚酰胺点板效果还可以。想请教一下下一步是过聚酰胺柱,还是用葡聚糖凝胶LH-20(有人说,葡聚糖凝胶分黄酮较好),不知各位有何高见?并且30%部位只有6g。如果用聚酰胺,那么应该怎样收集样品,是否应该对聚酰胺进行预处理?是否跟硅胶柱层析一样,每2/3柱体积一份?

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4个回答

用聚酰胺的话要进行预处理吧,分新买的填料还是用过的填料。

新买的聚酰胺:取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡,不断搅拌,除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱,洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。再依次用2-2.5倍体积5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱,最后用蒸馏水洗脱至pH中性,备用。

用过的聚酰胺:一般用5%NaOH水溶液洗脱,洗至NaOH水溶液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺又不可逆吸附,用NaOH水溶液很难洗脱,可用5%NaOH在柱中浸泡,每天将柱中的NaOH水溶液放出一次,并加入新的5%NaOH水溶液,这样浸泡一周后,鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9,再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱,最后蒸馏水洗脱至pH中性。

2024-03-15 14:49:43

聚酰胺分离黄酮类化合物效果也不错啊。

其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中的羟基数目与位置。一般有以下规律:

1、苷元相同,连接糖越多,吸附力越大,流出越慢。

2、母核上增加羟基,洗脱速度相应减缓。

3、对位、间位酚羟基使吸附能力 〉邻位酚羟基。

4、不同类型的黄酮的流出顺序一般是:异黄酮 〉二氢黄酮醇〉黄酮 〉黄酮醇。

5、分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强,晚出柱。

6、若形成分子内氢键则吸附力减弱。

 


2024-03-15 15:16:23

我是大孔树脂60%乙醇洗下来的东西,然后过硅胶柱,薄层检测两个点,后来用了很多方法都没有分开,最后选用sephadex-LH-20,分开了,得到晶体。

2024-03-15 15:21:08

不提倡用聚酰胺,吸附及其严重,而且只适合于粗分,根本达不到细分效果。可以结合硅胶,凝胶分离

2024-03-15 15:30:45

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