2018-10-09 14:27:16

做中蛋白的纯化,上样后填料结块、堵柱等问题

做中蛋白的纯化, 由于上样液比较粘稠,而导致上样后填料结块、堵柱等问题,做小试的时候通过0.45ul的膜过滤后可以上样,但是过滤速度极慢,不适合放大。另外,该蛋白由大肠杆菌表达,然后由包涵体变性溶解,再没切得到的短肽。所以上样液中含有融合蛋白等大分子物质,导致上述问题。之前试过离子交换(source 30Q),不过滤可以直接上柱,但由于收率低,后面换用反相层析发现不过滤的话不能上样。 想请问大虾们有没有什么方法可以降低上样液的粘度。感激不尽!

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4个回答

可以考察一下目的蛋白的热稳定性,如果比较耐热,可以试试加温沉淀杂质。核酸,脂类的存在也会大大的影响样品粘度。

2018-10-09 15:49:07

不知你用的融合蛋白是什么?如果能用亲和层析的方法把融合蛋白去除,可一步获得切割后的目标多肽。

2018-10-09 16:42:58

直接上样对纯化压力太大了。所以应该考虑目的蛋白的状态和性质,从而考虑采取合适的纯化手段。最保险的是过滤,具体采用哪一种需要根据你的样品来选择。有膜包过滤,有切向流方式的过滤,还有压滤等。当然过滤有难度的话可以考虑助滤剂。其次,考虑分步分离:离心,盐析,有机溶剂沉淀等。再其次考虑一下设备公司。

2018-10-09 16:54:36

过柱前可以考虑深层过滤去除大分子物质,深层过滤膜包孔径不是单一数值而是一个范围,可以选择大孔径范围的试试,降低杂蛋白含量,提高上样液浊度。

2018-10-09 17:19:05

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