2020-07-10 17:24:26

waters ACCQ柱前衍生HPLC测定氨基酸含量的问题

用waters 氨基酸衍生包作氨基酸含量检测。色谱柱、流动相、试剂、标样等都是衍生包自带,梯度表也是严铬按照说明设的,我的机子是breeze系统,1525双元泵,柱温37度,紫外检测。现在问题是这样:a泵是盐流动相,b泵是乙腈水6:4,开机纯水冲洗a泵后,进空针走基线,连续进样。标样衍生后进样,同一标样连续进5针考察重现性,结果出峰时间的重现性很差,出峰时间有前有后,快的30分钟就出完最后一个蜂,慢的35分钟、38分钟,连着进了几天都这样。方法什么的都是衍生包自带的,资询过waters,说可能机子的单向阀脏了,不过清洗后出峰时间还是变得厉害,应该不是这方面原因。

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3个回答

保留时间影响的因素主要有以下几个:

1、温度不稳定,可以尝试在开机前将流动相等用25℃水浴恒温,液相房间空调温度调整至25℃。出峰时间基本会稳定。

2、乙腈的浓度,一开始的梯度洗脱,有机相用到的比例很小,如果比例阀、通道等有少许误差,保留时间会很乱。

3、流动相pH,一般用4.95,如果pH不准,保留时间相差较大。

2020-07-10 21:13:05

估计是泵流量不稳的原因。往往走梯度时会出现这个的问题。比例阀有问题。

2020-07-10 22:34:52

我前段时间做过这个,结果还可以。1525二元泵,不过流动相和你说的不一样,我们不用盐的。梯度主要还是AQCC包中介绍的梯度,自己再有所改动,AA的保留时间还是很稳定的,但是有时峰形不好,最后发现是ph的原因,微调下就好了,另外,做这个似乎系统平衡得巨长时间的。

2020-07-10 22:37:32

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