实验室中HPLC分析，主峰出现裂峰

HPLC流动相为离子对试剂溶液，乙腈，缓冲盐溶液配制而成。其中硫酸氢四丁基铵品牌为国药，乙腈品牌为MERCK，缓冲盐溶液为PH7.4(其配制试剂品牌为国药)，色谱柱为aglient C18，使用液相为aglient1200，检测器为VWD。实际的情况为：主峰峰面积大约在15w左右(empower积分下)，主峰会产生裂峰。柱子在分析样品前进行基线平衡，一般在2-3个小时，基线已经平衡后进行分析(对于新柱，含离子对试剂的流动相平衡时间是否过短？)。

在此液相系统中，进样量比较大，为100ul。样品溶液本身浓度不高，浓度为1ug/ml。此方法为转移方法，在之前遇到裂峰的情况下都会选择更换色谱柱来进行分析。目前在更换新柱的情况下，开始使用时某些新柱仍会出现裂峰。针对此情况，想请教各位老师，产生裂峰的原因大概在何处？在使用离子对流动相分析时，对于产生裂峰的情况有无经验可以分享。

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样品用什么溶剂溶解的，流动相吗？峰面积15w左右(empower积分下)的话，峰面积不大。有可能是样品溶液的极性和流动相的极性差别太大，造成裂缝。

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2024-03-22 05:10:38

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流动相乙腈和缓冲液比例是多少，稀释剂缓冲液pH11.0，流动相缓冲液pH7.4，pH都偏碱性，你用aglient C18是什么型号的，像Zorbax Eclipse XDB色谱柱合适的pH值是2-8，你可以查一下流动相，稀释剂的pH范围是不是在色谱柱的pH接受范围内。

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2024-03-22 05:14:29

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一楼的说法很对，一般裂峰主要考虑也是柱子的因数多，但是你也提到了，进样量偏大100ul，这么大的体积进入色谱柱的时候，短时间内是会改变色谱柱内流动相的pH值的，如果此C18的适用pH范围不在此，极有可能会伤害柱子。另外，虽说新柱子没怎么使用过，但是不是每个新柱子性能都一样好，个别也是会出现特殊情况，在你这样的方法下，使用色谱柱前，尽量多冲冲色谱柱，使用后也多冲洗，最好是反复使用高比例和低比例的有机相的溶剂冲洗。

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2024-03-22 05:36:42

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提问时间：	2024-03-21
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