2020-07-12 21:53:27

实验室中HPLC分析,主峰出现裂峰

HPLC流动相为离子对试剂溶液,乙腈,缓冲盐溶液配制而成。其中硫酸氢四丁基铵品牌为国药,乙腈品牌为MERCK,缓冲盐溶液为PH7.4(其配制试剂品牌为国药),色谱柱为aglient C18,使用液相为aglient1200,检测器为VWD。实际的情况为:主峰峰面积大约在15w左右(empower积分下),主峰会产生裂峰。柱子在分析样品前进行基线平衡,一般在2-3个小时,基线已经平衡后进行分析(对于新柱,含离子对试剂的流动相平衡时间是否过短?)。

在此液相系统中,进样量比较大,为100ul。样品溶液本身浓度不高,浓度为1ug/ml。此方法为转移方法,在之前遇到裂峰的情况下都会选择更换色谱柱来进行分析。目前在更换新柱的情况下,开始使用时某些新柱仍会出现裂峰。针对此情况,想请教各位老师,产生裂峰的原因大概在何处?在使用离子对流动相分析时,对于产生裂峰的情况有无经验可以分享。

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3个回答

样品用什么溶剂溶解的,流动相吗?峰面积15w左右(empower积分下)的话,峰面积不大。有可能是样品溶液的极性和流动相的极性差别太大,造成裂缝。

2020-07-13 03:06:52

流动相乙腈和缓冲液比例是多少,稀释剂缓冲液pH11.0,流动相缓冲液pH7.4,pH都偏碱性,你用aglient C18是什么型号的,像Zorbax Eclipse XDB色谱柱合适的pH值是2-8,你可以查一下流动相,稀释剂的pH范围是不是在色谱柱的pH接受范围内。

2020-07-13 03:10:43

一楼的说法很对,一般裂峰主要考虑也是柱子的因数多,但是你也提到了,进样量偏大100ul,这么大的体积进入色谱柱的时候,短时间内是会改变色谱柱内流动相的pH值的,如果此C18的适用pH范围不在此,极有可能会伤害柱子。另外,虽说新柱子没怎么使用过,但是不是每个新柱子性能都一样好,个别也是会出现特殊情况,在你这样的方法下,使用色谱柱前,尽量多冲冲色谱柱,使用后也多冲洗,最好是反复使用高比例和低比例的有机相的溶剂冲洗。

2020-07-13 03:32:56

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