2019-07-10 10:31:43

做WCX分析纯化后的抗体蛋白,总是有一些碱性峰问题使纯度达不到要求

做抗体仿制药方面遇到一些问题,在做WCX分析纯化后的抗体蛋白,总是有一些碱性峰问题使纯度达不到要求。该从哪些地方着手解决。是从培养工艺优化还是从纯化工艺?

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药物学×

3个回答

从图中看你的电荷变异情况是比较复杂的。至于是否需要去除,达到很高的纯度,需要与你的原研药做个对比,看哪些峰,酸碱比例是否对应。 对于后两个碱性峰,首先你需要确认是何种引起的,是否是羧肽酶的不完全切除导致K的残留,以及焦谷氨酸环化等引起。 控制,可以从发酵,比如控制金属离子,可以影响羧肽酶的活性。阳离子工艺优化,损失适当的回收率,调节洗脱方式也能得到很好的结果,比如洗脱盐溶度降低,洗脱样品碱性组分含量越低,这也很容易理解。调节pH值的方式对于控制pH值也非常有用。


2019-07-10 14:15:14

WCX是弱阳离子柱。抗体分子在发酵、纯化过程中出现结构上的不同修饰(电荷异构体,版内有相关的讨论),这些修饰导致分子pI出现微弱的差异,这个现象是所有重组表达的抗体普遍存在的。因为差异本身就非常小,用强阳离子填料比较难分离,所以基本上分析中都用弱阳离子。WCX分析出现多个峰本质上是存在多个不同的组分,但是只要批间一致性没问题的话是允许的。

你的样品分析结果19min后面的峰也许就是一些电荷异构体,当然也有可能是聚体(这个可以结合SEC的结果分析)。如果非要将这些峰去除的话(如若是仿制药原研药中没有这两个峰)适当的摸索下阳离子工艺应该是可以去除的。

2019-07-10 15:15:41

关于仿制药的性质研究方面的问题认为主要分为以下几个部分,首先是对自己产品的基本理化性质进行深入全面的鉴定,然后将自己的产品与原研厂的产品进行比较研究,找出相同和不同,最后针对不同的地方结合临床前与临床研究进行综合考察,说明这些不同不会对产品的有效性和安全性造成影响。

至于多大的差异可以接受,首先需要确定你的工艺是否稳定,工艺不稳定,不管什么样的差异都很难说服CDE。工艺稳定之后,通过多批次样品的比较久可以指导因为工艺的因素可能会对样品的性质造成多大的波动,再结合检测过程本身的误差,从而知道这种差异是由于工艺和检查造成的还是产品本身就是与原研厂的不同。如果确实不同则需要分析这个不同之处是否会对产品的理化性质造成显著影响,根据其影响的严重程度则可以设计相应的细胞学、临床前或动物实验来分析其生物学活性、药效、药代动力学是否有显著差异。如果其活性或药代出现显著变化,则这个差异通常是不被允许的,如果没有,则可以与CDE进行沟通。生物仿制药很难和原研产品完全一致,比如糖基化的情况几乎和原研厂不可能一致,这就需要从各个方面来对其最终的安全性和有效性进行充分的说明。

2019-07-10 15:50:04

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