2020-07-14 18:19:37

抗体杂质检测项中的HCP残留酶联免疫检测方法专属性怎么验证?

我们用的Cygnus F550 CHO HCP ELISA kit,现在在做方法验证,专属性怎么做?希望有单抗药物临床申报经验的同行给点意见。

中检院曾指出过“对于不同的目的蛋白质,根据分子量大小和等电点的不同,会采取不同的分离纯化工艺。不同的分离纯化工艺会导致细胞蛋白残留量和组成上的较大差异。只有根据不同的生产工艺,制备工艺特异的细胞蛋白标准品和特异的抗血清,建立相应的检测方法,才能更真实反应供试品的’细胞蛋白残留量。”

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3个回答

商业化的HCP kit检测的结果只能代表通用的那些HCP的含量和比例,但是每个项目都有其特异的HCP比例,且各个蛋白对HCP的检测干扰程度不一样,所以见了专属的HCP检测方法是非常必要的。

2020-07-14 19:24:41

HCP抗体制备很少有免疫老鼠制备抗体的。cygnus试剂盒及abcam公司中的HCP抗体是羊多抗或兔多抗,这样的好处很明显,一次制备量可以够用几年甚至上十年,也避免不同制备批次间的差异。如后期工艺稳定,考虑工艺特异性,可另外再制备工艺特异性抗体,适合申报注册等。工艺特异抗原的制备,就是空白菌经过相同的发酵及纯化条件处理后所得,当然,纯化至哪一步,这个就得具体问题,具体分析了,不建议到最后一步,虽然针对性会更强,但不能保证不会缺失部分HCP,建议层析一步或两步,目的蛋白纯度达到一定要求就可以了

2020-07-14 20:01:22

专属性就是找一些市售的抗体药物或无关蛋白看看它的交叉反应吧。CNKI上有几篇做疫苗的宿主蛋白残留方法学的文章是这么做的,你可以参考下。但不知道这个对重组单抗适不适应。

一般宿主蛋白对照品都是通过裂解或冻融宿主细胞制备的。中检院的意思是你需要把通过裂解或冻融提取的宿主蛋白在你的整个工艺流程中走一遍,最后通过富集来获得“特异性的宿主蛋白”标准品。首先你的知道怎么富集宿主蛋白,其次你得要大量的宿主蛋白和工艺量才能获得足量的宿主蛋白。这个类似于化药里面自制杂质对照品一样。真要这么做代价也太大了吧。。。 还有你引用的这些话是从文件里看到的吗?何种渠道得知的。

2020-07-14 20:02:21

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