2022-01-08 17:01:03

目的和内参在同一张膜上该怎么孵抗体?

目的分子量44,内参43,一抗分别是兔多抗、鼠偶联hrp的单抗,请教各位目的和内参在同一张膜上该怎么孵抗体?先谢过大家了

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7个回答

用一抗洗脱液后,重新封闭,孵第二种抗体

2022-01-08 18:25:03

如果蛋白样品足够的话还是建议跑两块胶,分别看内参和蛋白;如果一定要在同一张膜上面看的话,可以先看目标蛋白的表达,再用stripping buffer孵育去除一抗,再重新封闭,按照一样的步骤看内参,但这种方法比较不好掌控,stripping不到位,原本的抗体会有残留,stripping过度的话,再看内参的信号会很差。祝好运

2022-01-08 19:07:07

电泳的时候多跑一会儿,让两个蛋白分开一点,切胶转在一张膜上,孵抗体时两个抗体放在一起孵。我试过,不影响的。希望可以帮到你。

2022-01-08 19:10:20

先显影目的条带,显影完后,洗脱,重新显影内参

2022-01-08 19:30:31

比较常见的内参就是GAPDH和beta actin了,它们俩分子量不同,一个是36,一个是42,可以满足不同的分子量要求。还有,因为还是隔得比较近,你就可以考虑换用更高浓度的分离胶,把目的蛋白和内参尽量分开点。孵抗体的时候先孵目的蛋白,显影后再洗膜,再重新孵内参就好了。

2022-01-08 20:08:04

也可以把条带剪开,分别孵抗体啊。

2022-01-09 13:15:59

可以的话换个内参    

2022-01-09 17:47:32

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