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2024-04-05 15:13:17

目的和内参在同一张膜上该怎么孵抗体？

目的分子量44，内参43，一抗分别是兔多抗、鼠偶联hrp的单抗，请教各位目的和内参在同一张膜上该怎么孵抗体？先谢过大家了

细胞生物学 生物化学
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7个回答

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用一抗洗脱液后，重新封闭，孵第二种抗体

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2024-04-05 16:37:17
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如果蛋白样品足够的话还是建议跑两块胶，分别看内参和蛋白；如果一定要在同一张膜上面看的话，可以先看目标蛋白的表达，再用stripping buffer孵育去除一抗，再重新封闭，按照一样的步骤看内参，但这种方法比较不好掌控，stripping不到位，原本的抗体会有残留，stripping过度的话，再看内参的信号会很差。祝好运

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2024-04-05 17:19:21
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电泳的时候多跑一会儿，让两个蛋白分开一点，切胶转在一张膜上，孵抗体时两个抗体放在一起孵。我试过，不影响的。希望可以帮到你。

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2024-04-05 17:22:34
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先显影目的条带，显影完后，洗脱，重新显影内参

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2024-04-05 17:42:45
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比较常见的内参就是GAPDH和beta actin了，它们俩分子量不同，一个是36，一个是42，可以满足不同的分子量要求。还有，因为还是隔得比较近，你就可以考虑换用更高浓度的分离胶，把目的蛋白和内参尽量分开点。孵抗体的时候先孵目的蛋白，显影后再洗膜，再重新孵内参就好了。

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2024-04-05 18:20:18
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也可以把条带剪开，分别孵抗体啊。

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2024-04-06 11:28:13
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可以的话换个内参    

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2024-04-06 15:59:46

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提问时间： 2024-04-05
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