2020-12-23 09:07:51

细菌基因敲除的供体菌构建失败,转化怎么都不长菌

我的插入片段约1600bp,载体约6000bp。

在确定双酶切条带正确后,进行胶回收,回收上来:插入片段20ng/ml,质粒载体30ng/ml。

然后我用10ul连接体系,其中插入片段6ul,载体2ul,T4连接酶和buffer各1ul,连接过夜。

第二天用热击法进行转化,然后摇了2.5h后涂kan板,但是2天了毛都不长,与此同时质粒对照却长得很好。

然后我用剩下的连接产物跑了块胶,如图。

已经快卡在这儿快两个月了,师姐自己做她的基因也是这样。人快傻了,救救孩子吧……


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