2024-04-08 11:09:17

吉玛FAM-siRNA使用脂质体lipo2000转染,为什么荧光这么低?

这是2ul lipo2000+3ul FAM-siRNA(浓度20pm/ul),24孔板,转染后24小时观察的图片,为什么荧光这么低?  

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细胞生物学×

2个回答

虽然转染24h荧光还不会太强,但你的24h也有一点弱,说明转染效率太低。上面图片好像仅20%,要提高至70%才有实验意义。你后续观察48h吧。

其实转染效率主要跟转染时的细胞密度、状态有关,和拍照效果也有点影响,像题主需要先做几个比例浓度梯度的筛选。我一般是在细胞融合度60-70%时进行转染(这里说明下:因为是转染前1天经行铺板,铺板时细胞密度要掌握好,可事前摸索下每个培养板最适合的铺板密度,因为不仅是为这次荧光,之后的转染都可以用这个铺板细胞数。刚开始做实验都是要有很多次的摸索的,多问师兄师姐,有的条件他们都摸索好了就可以直接用),转染6小时后换液后马上进行荧光镜观察和拍照,这个转然后6h荧光最强,中间过程注意避光,是直接于倒置荧光镜先观察的。最后确定Lipofectamine2000终浓度,siRNA的终浓度,这个跟细胞株种类相关,每个细胞株最适浓度不同。


2024-04-08 11:22:58

细胞轮廓不清楚,不好断定。你可以加点DAPI,有助于判定。    

而且你为什么不用流式检测呢,吉玛的FAM-siRNA的荧光很微弱,在荧光镜下截图也很有多要求,得到的图如果你要用到文章里感觉说服力也不大,如果检测转染效率的话,建议还是用流式检测或者做WB/PCR什么的吧~    

2024-04-08 11:33:08

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