2024-04-08 16:38:35

有一株L02细胞,复苏出现各种问题,这要咋办?

之前库里有一株L02细胞,复苏出来后长得很慢,差不多一周才能长到80%,还是勉强给传代,但是没有扩增(Pn+1)。

传代后细胞长势明显快了,开始1:2传代,传到4瓶(T25)的时候(Pn+3)时冻存了2株,剩余继续1:2传代。过了一个周末,等周一看的时候就已经全部污染了。/(ㄒoㄒ)/~~

于是将冻存的细胞复苏(Pn+3),T25瓶次日就长满了,于是再1:2传代(Pn+4)次日长满,再冻存一株,另一瓶按1:3传代。污染,卒。

将(Pn+4)冻存的细胞继续复苏,同上诉情况,也是传代2次后就污染,而且均是爆发式的细菌污染,很恐怖。后续复苏时用1000U的双抗都压制不住。

现在不敢再复苏细胞了,一是复苏一株少一株,已经只剩下一个种子了;另外也担心早期的L02就存在污染,现在细菌已经爆发无法挽救。

现求助各位大侠,这种情况还有办法补救吗?

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细胞生物学×

3个回答

更换实验所用相关试剂,安全柜和培养箱消毒。这样都不行的话,估计库存的那一只本身就有问题,建议放弃最后这一管,重新找细胞养。

2024-04-08 16:53:21

要不你试试带双抗充分稀释然后分种多个24孔板,盖盖子前用酒精棉签消毒每个孔口,加细胞悬液时每次每孔都更换枪头,观察发现污染马上用封口膜严密覆盖其他孔口后酒精喷洒充分消毒并吸走污染区液体,然后继续每个孔口再用酒精棉签消毒。长一两天没污染的迅速转移其他孔板培养。又或者是复苏后先用双抗的培养基充分稀释后用最低的离心力把细胞分离出来(这方法有点赌运气,赌细胞重量比细菌重),离心后要彻底把培养基洗干净,然后再培养,等细胞都贴壁生长后就换液,用含双抗的dPBS多洗几次,再加上新培养基。讨论下看这方法行不行的通?    

2024-04-08 16:54:23

可以尝试复苏的时候离完心用双抗洗几遍。

2024-04-08 16:57:04

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