2020-06-18 21:35:28

HPLC检测样品出锋太快怎么办?

我要测一种色素的含量,用反相,流动相用甲醇和乙酸胺溶液(2*10-3mol/ml)(60:40)标准样品极性很低,用Hcl和乙氰溶解,柱子是岛津C18。(4.6*150),流速1.5ml/min,标准品进样后1.1min就出锋,样品也是单锋,且0.5ml/min时3.14min出锋,觉得根本没有分离。

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6个回答

样品的色谱行为可能与PH有很大关系,是否可以改用别的方式溶解进样~~~最好是用流动相,还可以消除溶剂效应.如果是要达到分离成份目的的话,建议PH或离子强度尽量使待分离化合物保持分子状态,这样会在柱子上有较长的保留时间,达到分离的效里。

2020-06-19 01:25:27

1min出峰肯定是样品在柱子上没有保留。调节保留时间可从以下方面考虑:

1)调节流动相比例:被测物极性小,可试试增加流动相中水相的比例;

2)调节流动相(水相)的pH值。有时,保留时间对比例不敏感,但对pH值很敏感。可用两个极端的pH(高、低)流动相试试,观察是否敏感。

3)有一点疑问:你的被测物都是低极性的吗?是否含极性较大的成分?在你描述的条件下(柱子、流动相等),极性大的成分容易出现不保留的现象(可加入离子对试剂,如烷基磺酸盐,保留时间即可延长)。

4)考虑改变溶解样品的溶剂:进不同溶剂,先观察一下溶剂峰的情况,然后用不同极性或pHd的溶剂溶解样品,进样。

5)更换色谱柱。

以上意见仅供参考。

 

2020-06-19 01:57:30

从你的描述来看,1.1min出峰,肯定在柱上没保留,让我们来看看你的问题可能出在哪?1你的样品用HCl溶解可能成盐,所以在柱上没保留。2流动相中盐的PH值低,使碱性化合物成盐,在柱上没保留。解决方法1你的样品改用丙酮或者DMSO等纯有机溶剂溶解样品。2提高PH值,看看保留时间能否延长。以上意见仅供参考。

2020-06-19 02:58:52

你的目标峰根本没有出来吧,1.1 min出来的只是溶剂峰。样品保留太强。解决办法:1、增大乙酸胺的浓度2、增大甲醇的量3、控制PH值在4~6之间4、改用CN柱或C8柱。

2020-06-19 03:00:54

可以先试一下梯度以确定你的目标峰在什么条件下出,这点很重要。如果在60%甲醇或以下合适,那么你溶解样品的溶剂可能不合适。乙腈的洗脱力要比你流动相的洗脱力强很多,这也可能是样品无保留的一个原因。

2020-06-19 03:43:37

调节流动相极性,小极性洗脱

2020-06-19 07:02:32

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