2020-10-28 07:20:26

2-DE的差异蛋白还需用Real-time RT-PCR验证吗?

请问,我用比较蛋白组学方法,鉴定了几十个差异的蛋白。目前已完成了质谱鉴定,知道了差异蛋白的名称和基因序列,还需要再用Real-time RT-PCR验证mRNA表达量的差异吗?谢谢!


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4个回答

是的,需要。这样你就能大概知道你发现的这个调控关系是哪个水平的。转录?修饰?转录后?mRNA稳定性?翻译效率?蛋白降解?......

2020-10-28 07:22:57

不过最好还是在蛋白水平验证,目前蛋白组学实验做完后,想发SCI(当然0-1分的或许不验证也可以),一般都需要进行验证的。进行的验证的主要目的是为了证明质谱结果或双向图谱分析的差异信息是否是真实存在的。因为单纯蛋白组学的定量信息有可能是不真实的【不管是基于LC的伙食2D凝胶的】。所以需要验证这一步。但由于RNA水平和蛋白水平,可能存在不一致的情况,所以最好不要单独做RNA水平的验证。而最好是做蛋白水平(WB或Elisa) 有条件的话,可以同时把RNA水平也做了。


2020-10-28 07:24:32

是的 一般做westernblot或elisa验证即可发表文章了,如需提高文章的含金量,可在进行mRNA水平的研究,将蛋白与差异基因关联分析


2020-10-28 07:26:33

差异蛋白一般是翻译水平有差异,最好先做wb,再做荧光定量

2020-10-29 00:46:07

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