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2024-06-27 23:18:56

使用HPLC生物液相进行SEC聚集体分析蛋白样品，结果重复性不好，为什么？

使用的是HPLC生物液相系统，色谱柱为Bio-SEC凝胶过滤柱，第一次做的分离度挺好的，后来这根柱子做过其他的蛋白分析，出现问题，当再次将这个marker标样进样分析时，发现分离明显不好，层析柱的分离效果明显下降，做了验证HPLC系统没有问题，压力正常，色谱柱多次使用过程中压力也都正常，使用的缓冲液都是色谱级的纯缓冲盐系统（PBS、Tris），请问出现这种情况，色谱柱是报废了么？是什么原因导致的呢？

药物学药理学药物分析

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5个回答

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出现这种情况无非两种情况，一种是柱子柱效出现问题，另一种是样品出现问题。对于第一种，你可以按照柱子出厂时的柱子使用说明书的方法测定一下柱效。对于第二种，那就是样品问题，对于MARKER，你要分装。对于样品你看探索稳定的储存条件，并做好分装，避免反复冻融。

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2024-06-27 23:30:03

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先按出厂的那个标准做一下柱效的评估吧。再检查一下样品的配制和稳定性问题。

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2024-06-27 23:34:08

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你标准品是什么条件保存的，保存了多长时间？如果你确定两次实验的操作流程是相同的，那柱子的问题可能性大。

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2024-06-27 23:38:20

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这个柱子应该有最大使用压力吧，你用的过程中有没有超过最大压力，没有的话，柱头污染的可能性很大，凝胶柱是可以活化的吧，具体问一问色谱柱厂家工程师吧。

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2024-06-27 23:39:21

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测别的样品都是这样子吗，可能是柱头污染或者是柱头塌陷。

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2024-06-27 23:41:25

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提问时间：	2024-06-27
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最近回答：	2024-06-27

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