2020-03-23 15:32:24

使用HPLC生物液相进行SEC聚集体分析蛋白样品,结果重复性不好,为什么?

使用的是HPLC生物液相系统,色谱柱为Bio-SEC凝胶过滤柱,第一次做的分离度挺好的,后来这根柱子做过其他的蛋白分析,出现问题,当再次将这个marker标样进样分析时,发现分离明显不好,层析柱的分离效果明显下降,做了验证HPLC系统没有问题,压力正常,色谱柱多次使用过程中压力也都正常,使用的缓冲液都是色谱级的纯缓冲盐系统(PBS、Tris),请问出现这种情况,色谱柱是报废了么?是什么原因导致的呢?


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5个回答

出现这种情况无非两种情况,一种是柱子柱效出现问题,另一种是样品出现问题。对于第一种,你可以按照柱子出厂时的柱子使用说明书的方法测定一下柱效。对于第二种,那就是样品问题,对于MARKER,你要分装。对于样品你看探索稳定的储存条件,并做好分装,避免反复冻融。

2020-03-23 15:43:31

先按出厂的那个标准做一下柱效的评估吧。再检查一下样品的配制和稳定性问题。

2020-03-23 15:47:36

你标准品是什么条件保存的,保存了多长时间?如果你确定两次实验的操作流程是相同的,那柱子的问题可能性大。


2020-03-23 15:51:48

这个柱子应该有最大使用压力吧,你用的过程中有没有超过最大压力,没有的话,柱头污染的可能性很大,凝胶柱是可以活化的吧,具体问一问色谱柱厂家工程师吧。


2020-03-23 15:52:49

测别的样品都是这样子吗,可能是柱头污染或者是柱头塌陷。

2020-03-23 15:54:53

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